MYCOBACTERIUM, VILJELY JA VÄRJÄYS

Indikaatiot

Epäily mykobakteeri-infektiosta. Menetelmällä voidaan osoittaa ja erotella M. tuberculosis ja ympäristömykobakteerilajit sekä näiden mikrobiläkeherkkyys. Tutkimus ei sovellu lepraa aiheuttavan M. leprae -bakteerin osoittamiseen.

Lähete/tutkimuksen tilaaminen

Mikrobiologian tutkimuspyyntö tai yleislähete.

Lähetetiedoista tulee ilmetä mahdollisesti aiemmin sairastettu mykobakteeritauti ja näytteenottohetkellä käytössä oleva mikrobilääkehoito.

Näyteastia

Falcon tehdaspuhdas putki, 50ml (sentrifugiputki; ensisijainen näyteputki hengitystienäytteille)
Tehdaspuhdas purkki, 60 ml
Steriili purkki, 70 ml
Tehdaspuhdas näyteputki
Li-hepariiniputki, geelitön
Näytteenottotikku, esim. dacrontikku
BD Bactec Myco/F Lytic veriviljelypullo

Näyte

Mykobakteeriviljelyssä suurempi näytemäärä pääsääntöisesti parantaa tutkimuksen herkkyyttä, koska runsaita näytteitä voidaan konsentroida. Tämä tulee kyseeseen eryisesti ekstrapulmonaaristen ja laimennettujen (huuhteet) näytteiden kohdalla. Merkittävänä poikkeuksena on veri, jossa suositeltua näytemäärää ei tule ylittää. Tutkimus voidaan suorittaa vain tuorenäytteestä, ei kiinnitetystä/fiksatusta näytteestä. 

Yskös (Ex-TbVi):
- 3 - 5 ml ysköstä Falcon-putkeen. Näytteitä tulisi toimittaa 3 kpl: 1. aamulla, 2. päivällä, ja 3. seuraavana aamuna.

Muut hengitystie-eritteet (-TbEVi): 
- BAL-neste: vähintään 20 - 50 ml Falcon-putkeen.
- imunäytteet: ilman huuhtelua otetuilla näytteillä ysköstä vastaava näytemäärä, huuhtelulla BAL-nestettä vastaava näytemäärä.

Virtsa (-TBVi):
- vähintään 100 ml aamuvirtsaa Falcon-putkeen. Suuri näytemäärä ja toistuva näytteenotto parantavat tutkimuksen herkkyyttä.
- mikäli virtsa otetaan virtsajohtimista esim. katetroimalla, 5 - 10 ml riittää

Kudosnäytteet (-TbEVi):
- steriiliin näytepurkkiin, suositeltava näytekoko 2x2x2 mm

Punktionesteet (-TbEVi):
- tehdaspuhtaaseen, tiiviseen näyteputkeen, yli 10 ml näytteet Falcon-putkeen
- mahanestettä 20 ml
- askitesnestettä 5 - 10 ml. Biopsia on askitesnestettä edustavampi näytelaatu.
- likvoria suositellaan 5 ml riittävän herkkyyden takaamiseksi. Pieni näytemäärä heikentää olennaisesti tutkimuksen herkkyyttä. Aikuisilla alle 1 ml näytteitä ei suositella analysoitaviksi. Erityisesti lapsilla myös suositeltua pienemmät näytemäärät tulevat kyseeseen.
- pleuranestettä vähintään 20 - 50 ml. Biopsia on pleuranestettä edustavampi näytelaatu.
- nivelneste on otettava antikoagulanttia sisältävään geelittömään Li-hepariiniputkeen (-TbNhO-tutkimusta ei voida tehdä Li-hepariiniputkesta)

Iho ja muut pinnalliset näytteet (-TbVi):
- mikäli pinnallisesta infektiosta ei saa kudosbiopsiaa tai juoksevaa märkää voi näytteen ottaa näytteenottotikulla hankaamalla. Tikku lähetetään suljetussa, tehdaspuhtaassa kartioputkessa.

Uloste (-TbVi):
- pieni määrä (1 g) ulostetta tehdaspuhtaaseen näytteenottoastiaan

Veri (B -TbEVi): 
- 3 - 5 ml verta yhteen BD Bactec Myco/F Lytic -pulloon samalla tavoin kuin tavallisessa veriviljelyssä. Aseptinen tekniikka on tärkeää. Maksiminäytemäärää ei tule ylittää. Myös luuydinnäyte tulee ottaa suoraan BD Bactec Myco/F Lytic -pulloon.

Näytteen säilytys, kuljetus ja esikäsittely

HUOM! Näytteet on pakattava yksittäin muovipussiin.

Näytteet säilytetään jääkaappilämpötilassa ja kuljetetaan kylmäkuljetuksena laboratorioon. Peräkkäisinä päivinä otetut näytteet voidaan säilyttää jääkaapissa ja lähettää laboratorioon samassa kuljetuksessa.
Huom. Poikkeuksena veri-/luuydinviljelypullot, jotka säilytetään ja kuljetetaan huoneenlämpöisinä.

Menetelmä

Mykobakteeriviljely ja -värjäys. Värjäystä ei tehdä virtsa-, uloste- eikä mahanestenäytteistä.

HUOM! Kasvavan ympäristömykobakteerin (muut kuin M. tuberculosis) tyypitys sekä herkkyysmääritys ovat erikseen laskutettavia jatkotutkimuksia . Tyypitys tehdään ilman erillistä pyyntöä yhdestä positiivisesta näytteestä kultakin potilaalta. Mikäli potilaalla on aiempi positiivinen tyypitetty mykobakteerilöydös edeltävän puolen vuoden ajalta, tyypitystä ei tehdä ilman erillistä pyyntöä. Mikäli tyypitys halutaan, asiasta tulee ilmoittaa Fimlabin mykobakteerilaboratorioon, puh. 03- 311 75236.

Mikäli kasvavasta, THL:lle lähetettävästä M. tuberculosis- kannasta halutaan maksullinen pikaherkkyysmääritys rifampisiinille ja isoniatsidille, asiasta tulee ilmoittaa Fimlabin mykobakteerilaboratorioon, puh. 03- 311 75236.

Tulos valmiina

Värjäys: 1 - 4 vrk:n kuluessa tai pyydettäessä päivystyksenä. Uudet värjäyspositiiviset tapaukset soitetaan. Uudet tapaukset suositellaan varmistettavan nukleiinihappo-osoituksella (4490, -TbNhO) M. tuberculosis -bakteerin poissulkemiseksi. TbNhO-tutkimus tulee tilata erikseen. 

Viljely: Negatiivinen 6 viikon kuluttua. Positiivinen 1 - 6 viikon kuluessa. Mikäli kasvu havaitaan vasta jatkokasvatuksessa 6. - 10. viljelyviikon aikana, oikaistaan aikaisempi vastaus. Herkkyysmääritys ja lopullinen lajitunnistus voivat kestää alustavan vastauksen jälkeen vielä useita viikkoja. Uudet M. tuberculosis -tapaukset sekä jatkokasvatuksessa oikaistavat tulokset soitetaan.

Viiteväli

Negatiivinen.

Tulkinta

Värjäys: Positiivisessa värjäysvastauksessa ilmoitetaan löydettyjen haponkestävien sauvojen määrä.

Viljely: Positiivisessa viljelyvastauksessa ilmoitetaan löydetyn mykobakteerin nimi ja määrä sekä herkkyystulos. Alustavana vastauksena ilmoitetaan "haponkestävä sauva".

M. tuberculosiksen löytyminen on aina merkitsevä. Atyyppisten mykobakteerien merkitys on ratkaistava tapauskohtaisesti.